فرآیند استخراج سیلیمارین
سیلیمارین، مخلوطی از فلاونولینان ها که بسیاری از فعالیت های دارویی را نشان می دهند ، از میوه های خار خار (Silybum marianum L. Gaertner) به دست می آید. با توجه به محتوای چربی زیاد در میوه های خار ، داروسازی اروپا یک فرآیند دو مرحله ای برای استخراج آن را توصیه می کند. ابتدا میوه ها به مدت 6 ساعت با استفاده از n-hexane چربی می گیرند. دوم اینکه ، سیلیمارین به مدت 5 ساعت دیگر با متانول استخراج می شود.
داده های ارائه شده نشان می دهد که این فرآیند استخراج بسیار طولانی سنتی Soxhlet می تواند با استفاده از استخراج مایع تحت فشار (PLE) به چند دقیقه کوتاه شود. PLE همچنین اجازه می دهد تا مرحله چربی زدایی مورد نیاز در روش سنتی از بین برود ، بنابراین روش استخراج سیلیمارین ساده شده و از از دست دادن سیلیمارین ناشی از چربی زدایی جلوگیری می کند. بهبودهای PLE که در شرایط استخراج بهینه به دست آمده به وضوح بهتر از مواردی است که با روش استخراج سوکسله که توسط فارماکوپه پیشنهاد می شود ، بهتر است.
بازده PLE سیلی کریستین ، سیلیدیانین ، سیلیبین A ، سیلیبین B ، ایزوسیلیبین A و ایزوسیلیبین B در استون به ترتیب 3.3 ، 6.9 ، 3.3 ، 5.1 ، 2.6 و 1.5 میلی گرم در گرم از میوه های بدون چربی است. استخراج 5 ساعته سوکسله با متانول روی میوه های بدون چربی ، تنها ∼72٪ مقدار سیلیمارین به دست آمده در 10 دقیقه PLE در 125 درجه سانتی گراد را می دهد.
Silybum چیست؟
Silybum marianum L. Gaertner که معمولاً به همین نام خوانده می شودخار شیر، خار پربرکت شیر ، Marian Thistle ، Mary Thistle یا Saint Mary&# 39؛ s Thistle ، گیاهی یک ساله یا دو ساله از خانواده Asteraceae است. این گیاه که در اصل در جنوب اروپا و آسیا در حال رشد است ، اکنون در سراسر جهان یافت می شود (1). این علف هرز دردسرساز در حال حاضر به عنوان یک گیاه دارویی کشت می شود و یکی از مهمترین محصولات دارویی در اروپا است.
خار مریم بیش از 2000 سال است که برای اهداف دارویی استفاده می شود ، معمولاً برای درمان بیماری کبد (سیروز و هپاتیت) و همچنین برای محافظت از کبد در برابر مواد سمی (2-5). علاقه به تحقیقات اخیر در مورد این گیاه با مطالعاتی که فعالیت ضد توموری فوق العاده زیاد آن را نشان می دهد تحریک شده است. عصاره های این گیاه در حال حاضر تحت آزمایش شدید شیمی پیشگیری از سرطان و بهبود اثرات جانبی شیمی درمانی قرار دارند (6). گزارش های اخیر نشان داده است که عصاره های این گیاه همچنین با بسیاری از فعالیت های دارویی مانند اثرات ضد التهابی و ضد فیبروتیک مشخص می شود (2 ، 7 ، 8).
سیلیمارین ، مخلوطی از فلاونولینان ها که بسیاری از فعالیت های دارویی را به نمایش می گذارد ، از دانه های خار خار (Silybum marianum L. Gaertner) بدست می آید. رویه های متداول که تاکنون برای استخراج سیلیمارین استفاده شده است ، اساساً بر اساس روش های کند-دما استخراج با حلال است. اشکال مرتبط با این تکنیک ها منجر به جستجوی فرایندهای جدید جایگزینی استخراج شده است که علاوه بر این می توانند بهبود یابندعصاره سیلیمارینکیفیت مورد دوم به ویژه از نظر کاربرد سیلیمارین بسیار مهم است. در واقع عصاره های سیلیمارین بدست آمده می تواند حاوی بقایای آلی سمی باشد که برای برآوردن مقبولیت مصرف کننده نیاز به حذف دارند.
در تلاش برای بهبود روند استخراج سیلیمارین و سازگارتر با محیط زیست ، اخیراً استخراج حلال با کمک مایکروویو ، استخراج حلال با کمک سونوگرافی ، استخراج مایع تحت فشار ، استخراج با کمک آنزیم ، استخراج مایعات فوق بحرانی و به ویژه استخراج آب بحرانی همچنین به عنوان روش های استخراج آب گرم تحت فشار شناخته شده و توسعه یافته است.
مواد و روش ها
ماده ی گیاهی
میوه های خشک S. marianum L. Gaertner در پاییز 2011 از یک داروخانه محلی (لوبلین ، لهستان) خریداری شد. یک نمونه نماینده به اندازه کافی بزرگ گیاه (حدود 500 گرم) آسیاب و الک شد تا اندازه ذرات 0.4 بدست آید. میلی متر از مواد دقیقاً توزین شده برای استخراج استفاده شد.
مواد و شناساگرها
عصاره خشک استاندارد S. marianum L. Gaertner و silybin B (با خلوص 98٪) ، که به عنوان استاندارد اعمال می شود ، از سیگما-آلدریچ ، لهستان خریداری شد. استون ، اتیل استات ، اسید فسفریک ، n-هگزان (همه آنها از نوع واکنش تحلیلی) و متانول (درجه واکنش تحلیلی و درجه HPLC) از کارخانه شیمی لهستان (POCh ، Gliwice ، لهستان) خریداری شده اند. آب با استفاده از سیستم Milli-Q از Millipore (Millipore ، Bedford ، MA ، USA) تصفیه شد. شیشه خنثی ، که به عنوان هدیه از کارخانه شیشه سازی محلی (کسری 0.4-0.6 میلی متر) به دست آمده است ، به عنوان عامل پراکندگی در سلول PLE استفاده شد.
استخراج مایع تحت فشار
PLE با ابزار Dionex ASE200 انجام شد (شرکت Dionex ، سانی ویل ، کالیفرنیا ، ایالات متحده آمریکا). مواد گیاهی (5/5 گرم) با مواد بی اثر (شیشه خنثی) مخلوط شده و در سلول استخراج 22 میلی لیتر استیل ضد زنگ حاوی کاغذ فیلتر در پایین قرار گرفت. دایره دیگری از کاغذ فیلتر در بالای سلول استخراج قرار گرفت. سرانجام ، سلول محکم بسته شد و در اجاق گاز قرار گرفت.
محتوای سلول در فشار عملیاتی 60 بار استخراج شد. در پایان فرآیند ، نمونه استخراج شده با استفاده از حجم حلال برابر با 60٪ سلول استخراج شستشو داده شد. سرانجام ، نمونه به مدت 60 ثانیه با استفاده از نیتروژن تحت فشار (150 psi) خالص شد و عصاره آن در یک ویال شیشه ای 60 میلی لیتری با درپوش لاستیکی روکش شده با تفلون جمع آوری شد. حجم عصاره جمع آوری شده بسته به تراکم بسته بندی سلول استخراج بین 25 تا 31 میلی لیتر بود. عصاره بدست آمده به داخل یک فلاسک حجمی 50 میلی لیتری منتقل و با استفاده از یک نوع حلال مناسب تا حجم آن پر شد. سه استخراج مستقل تحت همان شرایط انجام شد. بین دو نوبت ، سیستم با یک حلال استخراج مناسب شسته شد.
پارامترهای PLE مورد مطالعه نوع حلال (متانول ، استون و استات اتیل) ، دما (50 ، 75 ، 100 ، 125 و 150 درجه سانتیگراد) ، زمان (5 ، 10 ، 15 و 20 دقیقه) و تعداد چرخه های استخراج (1 –5) برای فرآیند چربی زدایی PLE ، n-hexane به عنوان حلال استفاده شد و پارامترهای مورد مطالعه دما (50 و 100 درجه سانتیگراد) و زمان (5 و 10 دقیقه) حذف لیپیدها بودند. عصاره های استون و استات اتیل در خلا خلا خشک شده و قبل از تجزیه و تحلیل کروماتوگرافی مجدداً در متانول حل شدند.
استخراج سوکسله
استخراج های طاقت فرسا در دستگاه Soxhlet با استفاده از مقادیر 2.0 گرم مواد انجام شد. نمونه های دقیقاً توزین شده به یک انگشت کاغذ منتقل شدند. انگشت لود شده در دستگاه استخراج Soxhlet 100 میلی لیتری قرار گرفت. استخراج در فرآیند دو مرحله ای انجام شد (3=n). در مرحله اول روش ، با استفاده از 75 میلی لیتر n-هگزان ، مواد گیاهی به مدت 6 ساعت چربی گرفته شد. در مرحله دوم ، سیلیمارین به مدت 5 ساعت با 75 میلی لیتر متانول استخراج شد. عصاره بدست آمده پس از خنک شدن به دمای اتاق به یک فلاسک حجمی 100 میلی لیتری منتقل شد که متعاقباً با متانول تا حجم خود پر شد. سه استخراج مستقل انجام شد.
تجزیه و تحلیل کروماتوگرافی عصاره ها
اندازه گیری HPLC در دستگاه کروماتوگراف مایع Dionex (شرکت Dionex) شامل یک محفظه کروماتوگرافی (LC20) حاوی یک شیر تزریق خودکار PEEK مجهز به یک حلقه نمونه 10 میکرولیتر ، یک پمپ گرادیان (GP50) ، یک آشکارساز جذب (AD25) انجام شد. و یک آشکارساز آرایه فوتودیود (PDA100). کل سیستم کروماتوگرافی تحت کنترل سیستم جمع آوری اطلاعات PeakNet6 بود. جداسازی های کروماتوگرافی با استفاده از یک ستون Prodigy ODS-2 (5 میکرومتر ، 6/4 250 250 میلی متر ، شناسه) (Phenomenex ، Torrance ، CA ، USA) در دمای 40 درجه سانتی گراد انجام شد. فاز متحرک A مخلوطی از متانول با محلول آبی اسید فسفریک حاوی 0.5 میلی لیتر اسید فسفریک 75٪ در 100 میلی لیتر محلول بود (35: 65 ، V / V). فاز متحرک B مخلوطی از متانول با محلول آبی اسید فسفریک حاوی 0.5 میلی لیتر اسید فسفریک 75٪ در 100 میلی لیتر محلول بود (50: 50 ، v / v). سرعت جریان 0.8 میلی لیتر در دقیقه بود. تجزیه و تحلیل در یک شیب فاز متحرک با درصد B در A متفاوت است به شرح زیر انجام شد: غلظت اولیه ، 0 B B. 28 دقیقه ، 100٪ B 35 دقیقه ، 100٪ B ، 36 دقیقه 0٪ B. قبل از تجزیه و تحلیل بعدی ، ستون با استفاده از فاز متحرک حاوی 0٪ B به مدت 20 دقیقه متعادل شد. هر عصاره سه بار مورد تجزیه و تحلیل HPLC قرار گرفت. طول موج برای تشخیص فلاونولینان ها 288 نانومتر تعیین شد و طیف UV-Vis از 210 تا 500 نانومتر نیز برای خصوصیات اوج ثبت شد.
تجزیه و تحلیل کیفی عصاره با مقایسه زمان ماندگاری قله ها و طیف UV-Vis آنها در عصاره ها با توجه به نمونه های استاندارد سیلیمارین خشک انجام شد. برای تهیه محلول استاندارد سیلیمارین خشک ، یک قسمت 0.02 گرم از نمونه حاوی 5.0 میلی گرم سیلیبین A + B در 50 میلی لیتر متانول حل شد. قله های سیلی کریستین ، سیلیدیانین ، سیلیبین A ، سیلیبین B ، ایزوسیلیبین A و B به ترتیب در زمان ماند 15.1 ، 17.4 ، 27.5 ، 29.1 ، 33.6 و 34.8 دقیقه ظاهر شدند. تجزیه و تحلیل کمی بر اساس استاندارد silybin B و از روش استاندارد خارجی استفاده شد. یک منحنی کالیبراسیون از پنج غلظت ترکیب در محدوده غلظت 0.1-1.0 میلی گرم در میلی لیتر ایجاد شد. سه اندازه گیری سطح اوج برای هر غلظت محلول استاندارد انجام شد. پارامترهای مشخصه منحنی کالیبراسیون بدست آمده به شرح زیر است: شیب ، 0.516 و رهگیری ، 0.003. منحنی کالیبراسیون در محدوده غلظت آزمایش شده خطی است. ضریب همبستگی> ؛ 0.995 پیدا شد. به دلیل دشواری خرید استانداردهای سیلی کریستین ، سیلیدیانین ، سیلیبین A ، ایزوسیلیبین A و B ، مقادیر این ترکیبات با ارتباط پاسخ های کروماتوگرافی آنها به منحنی کالیبراسیون سیلیبین B محاسبه شد.
تحلیل آماری
تمام داده ها به صورت میانگین dev انحراف معیار (SD) بیان می شوند. برای ارزیابی تأثیر شرایط PLE بر عملکرد سیلیمارین از آنالیز واریانس (ANOVA) و F-test استفاده شد. مقادیر میانگین زمانی تفاوت معنی داری داشتند که نتیجه پارامترهای مقایسه شده در سطح معنی داری 05/0=P متفاوت بود. برای بررسی اهمیت هر ضریب فیشر ، از مقادیر P استفاده شد.
نتایج
شکل 1a کروماتوگرام معمولی عصاره PLE حاصل از میوه های S. marianum L. Gaertner را نشان می دهد ، در حالی که شکل 1b کروماتوگرام استخراج سیلیمارین از محلول خار خار را نشان می دهد که محلول عصاره خشک استاندارد S. marianum L. Gaertner در متانول است (1 میلی گرم در میلی لیتر). تجزیه و تحلیل کروماتوگرام عصاره های PLE یا Soxhlet با آن برای محلول استاندارد (زمان احتباس ، طیف UV-Vis و شاخص اوج خلوص) ثابت کرد که شرایط کروماتوگرافی اعمال شده اجازه تفکیک کافی از ترکیبات مورد بررسی را می دهد ، قله های 1 تا 6 ، از اجزای ماتریس نمونه. قله ها به ترتیب مشخص شدند: (1) سیلی کریستین ، (2) سیلیدیانین ، (3) سیلیبین A ، (4) سیلیبین B ، (5) ایزوسیلیبین A و (6) ایزوسیلبین B ، به ترتیب.
چگونه خار خار را استخراج کنیم؟
برخلاف بیشتر گیاهان ، دانه های خار خار خیلی خوب در آب استخراج نمی شوند بنابراین سعی نکنید از آنها یک فنجان چای درست کنید! در عوض دانه های تازه آسیاب شده را بخورید ، یا یک کپسول با کیفیت خوب تهیه کنید. در صورت استفاده از دانه ها آنها را کامل بخرید و سپس در صورت لزوم آسیاب کنید (من از آسیاب قهوه استفاده می کنم تا به صورت پودر درشت در بیاید). بذرها یک باره طعم روغنی ، شیرین و تلخی دارند - شاید طعم اکتسابی باشد ، اما به هیچ وجه ناخوشایند نیست. ابتدا با خوردن 1/2 تا 1 قاشق غذاخوری در روز بر روی غذای خود پاشیده شده شروع کنید و احساس خود را ببینید ، مقدار مورد نیاز را تنظیم کنید.
عناصر
1 فنجان آب ولرم
1 فنجان الکل 100 نفری که از ودکا استفاده می کنم
در صورت امکان به 1 فنجان دانه خار خار شیر آسیاب کنید
دستورالعمل ها
شیشه میسون مورد استفاده را با قرار دادن تقریباً 10 دقیقه در آب جوش یا قرار دادن آن روی قفسه در فر با دمای حدود 250 درجه به مدت 15 دقیقه استریل کنید.
همه مواد را در ظرف شیشه ماسون بریزید.
یک درب جدید روی شیشه قرار دهید و آن را محکم با حلقه پیچ کنید.
حدود 1 دقیقه شیشه را به شدت تکان دهید.
ظرف را به مدت پنج هفته در یک مکان تاریک و خنک قرار دهید.
روزانه شیشه را تکان دهید تا دانه های خار شیر به بالای سطح شناور نشوند و به طور کامل با الکل و آب تزریق شوند.
در پایان هفته های تعیین شده ، خار شیر را از طریق صافی با مش ریز ، صاف کنید - مایع را نگه دارید. اگر صافی مشبک ریز ندارید ، از آبکش کوچک و / یا یک آبکش با چند فیلتر قهوه استفاده کنید تا اندازه دهانه ها کاهش یابد.
چه مدت طول می کشد تا خار خار اثر بگذارد؟
دانه خار شیر ممکن است از سلولهای کبدی در برابر مواد شیمیایی و دارویی سمی محافظت کند. همچنین به نظر می رسد دارای اثرات کاهش دهنده قند خون ، آنتی اکسیدان و ضد التهاب است.
بهبود پارامترهای استرس اکسیداتیو به طور مداوم در شش ماه&# 39 مشاهده شد. مدت زمان درمان با سیستم تحویل خار خار ویژه (2). بهبود الگوهای استرس اکسیداتیو مسئول بهبود سیگنالینگ انسولین و عملکرد سلولهای کبدی است.
خار مریم چه مدت باید مصرف شود؟ (دوز شیر خار)
خار شیر در دوزهای 420 میلی گرم در روز به صورت خوراکی و در دوزهای منقسم تا 41 ماه بی خطر تلقی می شود. یک منبع دوزهای روزانه 12 تا 15 گرم میوه خشک را برای سوpe هاضمه و اختلالات سیستم صفراوی پیشنهاد می کند ، در حالی که عصاره حاوی 200 تا 400 میلی گرم در روز سیلیمارین در انواع اختلالات کبدی موثر تلقی می شود.
مزایای خار شیر
1. از سلامت کبد پشتیبانی می کند
یکی از رایج ترین موارد استفاده از خار خار ، درمان مشکلات کبدی است. مطالعه ای در سال 2016 نشان داد که خار خار باعث کاهش آسیب کبدی ناشی از رژیم غذایی در موش ها می شود. شواهد بیشتری برای اثبات اینکه خار خار از کبد انسان به همان شیوه سود می برد لازم است. با این حال ، محققان نظریه پردازی می کنند که این کار مفید است. ماده فعال موجود در خار مریم ، سیلیمارین ، با کاهش تولید رادیکال های آزاد به عنوان یک آنتی اکسیدان عمل می کند. دانشمندان فکر می کنند که این یک اثر سم زدایی ایجاد می کند ، به همین دلیل خار خار آن ممکن است برای مشکلات کبدی مفید باشد.
با این حال ، تا زمان تحقیقات بیشتر ، خار خار به عنوان گزینه اصلی درمان مشکلات کبدی توصیه نمی شود. اما ممکن است یک درمان مکمل مفید باشد.
2. سلامت پوست را ارتقا می دهد
از روغن خار شیر می توان به صورت موضعی برای بهبود سلامت پوست استفاده کرد.
خار شیر ممکن است به ارتقا healthy پوست سالم کمک کند. یک مطالعه در سال 2015 نشان داد که خار خار به پوست در موشها کمک می کند تا شرایط التهابی پوستی ایجاد شود.
همچنین در مطالعه ای دیگر مشخص شد که خار خار دارای اثرات آنتی اکسیدانی و ضد پیری بر روی سلولهای پوست انسان است.
تحقیقات بیشتری در مورد انسان مورد نیاز است تا مشخص شود که فرد از استفاده از خار خار می تواند بر روی پوست خود منتظر باشد.
3. کلسترول را کاهش می دهد
کلسترول بالا می تواند منجر به مشکلات در سلامت قلب شود و احتمال سکته را در فرد افزایش دهد.
یک مطالعه در سال 2006 نشان داد که خار خار ممکن است نقش مهمی در کاهش سطح کلسترول داشته باشد. این مطالعه نشان داد که میزان کلسترول در افرادی که برای درمان دیابت خارخاردار مصرف می کنند کمتر از افراد دارونما است.
4. از کاهش وزن پشتیبانی می کند
تحقیقات اولیه حیوانات که در سال 2016 انجام شد نشان داد که سیلیمارین باعث کاهش وزن در موشهایی می شود که از رژیم غذایی برای افزایش وزن استفاده می کنند.
این نشان می دهد که خار خار برای افرادی که قصد لاغر شدن دارند مفید است. برای تأیید این موضوع ، تحقیقات بیشتری در مورد اثرات خار خار بر روی کاهش وزن در انسان لازم است.
5. مقاومت به انسولین را کاهش می دهد
مطالعه ای روی موش ها نشان داد عصاره خار شیر به کاهش مقاومت به انسولین کمک می کند. مقاومت به انسولین مشکلی برای افراد مبتلا به دیابت نوع 2 است.
اگرچه این تحقیقات نشان می دهد خار خار می تواند در مدیریت دیابت نقش داشته باشد ، اما تحقیقات بیشتری برای تأیید اینکه خار خار می تواند مقاومت به انسولین را کاهش دهد و یا از مدیریت دیابت حمایت می کند ، لازم است.
6. علائم آلرژیک آسم را بهبود می بخشد
ماده فعال موجود در خار شیر می تواند به کاهش التهاب کمک کند. مطالعه ای در سال 2012 نشان داد که سیلیمارین به محافظت در برابر التهاب در مجاری تنفسی موش های مبتلا به آسم آلرژیک کمک می کند.
تحقیقات بیشتری لازم است تا ببینیم آیا سیلیمارین از علائم آسم در انسان سود می برد یا خیر.
7. گسترش سرطان را محدود می کند
خار شیر ممکن است به جلوگیری از شیوع انواع خاصی از سرطان کمک کند. یک بررسی در سال 2016 نشان داد که عصاره خار شیر رشد سلولهای سرطانی را در سرطان روده بزرگ مهار می کند.
تحقیقات بیشتری برای تعیین چگونگی استفاده از خار خار برای کمک به مبارزه با سرطان لازم است.
8. از سلامت استخوان پشتیبانی می کند
چای خار خار ممکن است به جلوگیری از تحلیل رفتن استخوان ناشی از کمبود استروژن کمک کند. خار شیر ممکن است در حمایت از سلامت استخوان نقش اساسی داشته باشد. یک مطالعه در سال 2013 نشان داد که خار خار به جلوگیری از تحلیل رفتن استخوان کمک می کند. این مطالعه به طور خاص از دست دادن استخوان ناشی از کمبود استروژن را بررسی کرد. هنوز مشخص نیست که آیا خار خار به همان اندازه برای از دست دادن استخوان با علت متفاوت مفید است یا خیر. قبل از اینکه نتیجه گیری شود که خار خار از سلامت استخوان در انسان پشتیبانی می کند ، مطالعات بیشتری لازم است.
9. شناخت را بهبود می بخشد
مطالعه ای در سال 2015 نشان داد که خار خار مقاومت به استرس اکسیداتیو را افزایش می دهد. استرس اکسیداتیو دلیل بالقوه بیماری آلزایمر است.
به این ترتیب ، خار خار ممکن است به بهبود شناخت و درمان بیماری های تحلیل برنده که ذهن را تحت تأثیر قرار می دهد ، کمک کند. برای تأیید اثرات خار خار بر شناخت ، تحقیقات بیشتری در مورد انسان لازم است.
10. سیستم ایمنی بدن را تقویت می کند
خار شیر می تواند به تقویت پاسخ ایمنی&# 39 فرد کمک کند و به او در مبارزه با عفونت کمک کند.
مطالعه ای که در سال 2016 روی یک مدل حیوانی انجام شد ، نشان داد که عصاره خار خار باعث مصونیت در هنگام مصرف می شود. یک مطالعه قدیمی نشان داد که عصاره خار شیر تأثیر مثبتی بر پاسخ ایمنی در انسان دارد.
قبل از اینکه دانشمندان با اطمینان بگویند خار خار سیستم ایمنی بدن فرد را تقویت می کند ، به مطالعات بیشتری با شرکت کنندگان انسانی نیاز است.
عوارض خار شیر
به نظر می رسد خار شیر حتی اگر چندین سال مصرف شود عوارض جانبی کمی دارد. برخی از افراد حالت تهوع ، اسهال ، خارش و نفخ دارند.
برای پودر خار خار شیر ، لطفا با ما تماس بگیریدherbext@undersun.com.cn
منابع: https: //academic.oup.com/chromsci/article/53/2/366/307144
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780128093801000152
https://www.cambridgenaturals.com/blog/milk-thistle-food-for-the-liver
https://www.survivalsullivan.com/milk-thistle-extract/
https://www.webmd.com/digestive-disorders/ Milk-thistle-benefits- and-side-Effect
https://www.medicalnewstoday.com/articles/320362#how-to-use-milk-thistle
